Описание исследования

Коронавирус SARS-CoV-2 (Severea cutere spiratory syndrome-related coronavirus 2) – это сферический РНК-содержащий вирус, входящий в семействоCoronaviridae. Его диаметр составляет порядка 80-160 нм. Коронавирус является возбудителем синдрома COVID-19 –острого респираторного заболевания с потенциально тяжелым течением. Своё название SARS-CoV-2 получил благодаря входящим в состав его наружной оболочки S-гликопротеинам, имеющим форму шипов и придающим ему внешнее сходство с короной.

Предполагается, что первоисточником вируса были подковоносые летучие мыши, поскольку у них отмечается наличие генетически близких к SARS-CoV-2 штаммов коронавирусов. Также есть мнение, что промежуточными хозяевами вируса могут быть другие животные. Однако на данный момент главным распространителем заболевания является уже заболевший человек или бессимптомный переносчик инфекции.

Передача вируса осуществляется несколькими путями:

• воздушно-капельным;
• воздушно-пылевым;
• контактным (через рукопожатие, непосредственный контакт, поверхности, предметы обихода, пищевые продукты, загрязненные вирусом).

Наиболее распространенными являются воздушно-капельный и контактный путь инфицирования. Заражение в этом случае происходит при чихании, кашле, общении на расстоянии менее 1,5 метров.

Симптомы коронавирусной инфекции аналогичны клиническим проявлениям большинства острых респираторных вирусных заболеваний. Инфицирование достаточно часто сопровождается:

• высокой температурой и лихорадкой;
• сухим или с небольшим количеством мокроты кашлем с наличием или отсутствием боли в горле;
• затрудненным дыханием, одышкой;
• ощущением заложенности в груди.

В некоторых случаях заболевание может сопровождаться насморком, головной болью, тошнотой, поносом, слабостью, болью в мышцах. Поскольку вирус способен поражать клетки головного мозга, то на ранней стадии болезни может наблюдаться полная потеря обоняния и вкусовых ощущений.

Заболевание может протекать бессимптомно (количество бессимптомных носителей вируса составляет приблизительно 20% от общего числа лиц, пораженных коронавирусом). Наиболее частыми бессимптомными носителями вируса являются дети и молодые люди.

Способность провоцировать развитие заболевания (патогенность) и вызывать ответ иммунной системы (иммуногенность) SARS-CoV-2 обусловлена входящими в его состав антигенами. Коронавирус состоит:

a) из нуклеиновой кислоты, связанной с нуклеокапсидным белком (N-протеином);

b) из белковой оболочки (капсида), которая содержит белки-антигены:

• S-гликопротеин (он также называется спайковый белок, S-белок, spikeglycoprotein, шип);
• Е-белок (малый белок оболочки Е);
• М-белок (матричный белок М);
• НЕ (белок гемагглютинит-эстераза).

Гено́м вируса (биологическая информация, необходимая для его построения и поддержания жизнеспособности) представляет собой однониточную РНК, кодирующую 4 основных структурных белка вируса: N (нуклеокапсидный) белок, S (спайковый) белок, М (мембранный) белок и Е-белок. Основными иммуногенными белками являются S-белок и N-белок.

S-белок играет главную роль в фиксации и проникновении вируса в средину клетки. Его составляют две субъединицы – S1 и S2. Субъединица S1 содержит RBD-домен (область шипа S-белка), который связывается с рецептором атакуемой вирусом клетки – мембранным белком ангиотензинпревращающий фермент II типа (АПФ2). Его содержат оболочки клеток центральной нервной системы, дыхательных органов, сердца, почек, пищевода, мочевого пузыря, подвздошной кишки. Наибольшее количество рецепторов АПФ2 – в реснитчатом эпителии дыхательных путей и альвеолах легких. Субъединица S2 способствует слиянию вируса с клеточной мембраной и проникновению его в средину чувствительных клеток, где начинается активный процесс его размножения.

Специфическим ответом организма на попадание инфекции является продукция антител – молекул, вырабатываемых иммунной системой для борьбы с чужеродными веществами. Другое название антител – иммуноглобулины (Ig). Они делятся на классы – A, M, G, E, D. В лабораторной практике при инфекционных заболеваниях наиболее часто исследуется уровень антител классов IgM и IgG (в лаборатории «Наука» это поз.298,поз. 300 (М), поз.297, поз.299, поз.302 (G), поз.847 (качественный экспресс-тест на наличие IgM и IgG)). Обычно первыми появляются антитела М – они являются маркером текущей инфекции. Несколько позже начинается продукция антител G, наличие в крови которых может быть признаком поздней стадии заболевания/перенесенной в прошлом инфекции/наличия иммунитета к вирусу.

Иммуноглобулины класса А к коронавирусу SARS-CoV-2 исследуются реже, чем антитела классов M и G, но поскольку инфицирование происходит через слизистые оболочки, выработка антител А начинается практически сразу. Это позволяет обнаружить антитела IgА раньше прочих иммуноглобулинов и использовать исследование их уровня для ранней диагностики коронавируса. Кроме того, на основании полученного результата можно сделать вывод о степени тяжести инфекции.

Антитела IgА – иммуноглобулины, обеспечивающие барьерный местный иммунитет. Их содержат секреты организма – слюна, носовая слизь, пищеварительный сок, а также грудное молоко.

За выработку антител класса А отвечают преимущественно лимфоциты слизистых оболочек. Организм содержит два типа IgА: сывороточные (иммуноглобулины, содержащиеся в крови) и секреторные антитела. Продукцию сывороточных антител осуществляют плазмоциты (В-лимфоциты). Доля сывороточных IgA от общего количества антител всех классов составляет порядка 10-15%.

Главной функцией иммуноглобулинов класса А является защита от инфекции слизистых оболочек органов дыхания, пищеварения и урогенитального (мочеполового) тракта, борьба с вирусами и токсинами, вырабатываемыми микроорганизмами. Механизм их действия основан на способности препятствовать адсорбции, не давая бактериям прикрепляться к клеткам эпителия, предотвращая тем самым адгезию (сцепление), что позволяет уберечь клетку от повреждения. Благодаря наличию в составе антител секреторного компонента, они не перевариваются протеолитическими (расщепляющими белок) ферментами. Это позволяет успешно функционировать антителам на богатых ферментами поверхностях слизистых оболочек. Кроме того, антитела А через молоко матери обеспечивают защиту новорожденных.

Как уже отмечалось выше, продукция антител А к коронавирусу начинается в первые несколько суток от момента инфицирования. Они могут появляться одновременно с антителами класса М. По динамике нарастания их концентрации можно сделать предварительный вывод о тяжести течения заболевания и форме инфекции. Это подтверждается исследованием немецких ученых, наблюдавших динамику развития инфекции по изменению уровня антител А и G у супружеской пары, инфицированной коронавирусом, а также отслеживавших параллельно состояние еще трех обследуемых. У супруга болезнь протекала в тяжелой форме, у супруги – симптомы заболевания были значительно легче, у двоих из группы «поддержки» инфекция протекала в легкой форме, и один из обследуемых был здоров.

Проводимые наблюдения показали следующее.

Тяжелая форма коронавирусной инфекции характеризовалась низким начальным уровнем IgA и IgG с последующим повышением концентрации на протяжении болезни с достижением максимальной отметки на 22-й (последний) день. На 6-й день болезни появились только антитела А к вирусному полипротеину ORF1ab, и лишь в последний день началась продукция антител к S- белку и другим вирусным антигенам.

Легкая форма SARS-CoV-2 уже на третий день сопровождалась продукцией большого количества иммуноглобулинов А и G. По мере развития болезни уровень иммуноглобулинов понижался. Причем к спайковому (S) и другим белкам мембраны, оболочки и нуклеокапсидному белку антитела обнаруживались сразу же.

Полученные результаты позволяют сделать вывод о возможности применять количественное исследование антител класса А в качестве раннего прогностического маркера тяжести заболевания, поскольку уже на третий день их концентрация резко отличается. При этом развитие симптомов и возможность определить по ним тяжесть течения инфекции наступает позже. Кроме того, исследование немецких ученых показала потенциальную важность антител класса А в ответе иммунной системы на инфицирование коронавирусом.

Обратите внимание!

Кровь на COVID-19 сдается строго по записи. Записаться можно:

• на сайте компании «Наука», перейдя по следующим ссылкам:

Самара https://naykalab.ru/land3/covid.php;

Саратов https://naykalab.ru/land3/covid.php?region=saratov;

Пенза https://naykalab.ru/land3/covid.php?region=penza#pcr;

Оренбург https://naykalab.ru/land3/covid.php?region=oren;

Ульяновск https://naykalab.ru/land3/covid.php?region=ul;

Сызрань https://naykalab.ru/land3/covid.php?region=szr и заполнив форму внизу страницы;

• заказав обратный звонок;
• позвонив в любую лабораторию клиники «Наука» в вашем городе по указанным на сайте телефонам;
• через Call-центр по телефону +7 (846) 2-77-77-03 (04).

Подготовка к исследованию

Забор крови производится утром строго натощак, не ранее чем через 8-14 часов после вечернего приема пищи. Разрешено пить только чистую воду без газа (не минеральную). От употребления чая, кофе, соков и прочих напитков необходимо воздержаться.

Общие рекомендации:

• перед проведением обследования необходимо исключить психоэмоциональные и физические нагрузки (в том числе посещение плавательных бассейнов, спортивных залов, сауны и т.п.);
• за сутки до забора крови запрещено употребление алкогольных напитков (в т. ч. пива);
• за час до исследования запрещается курение;
• накануне обследования не переедать;
• перед сдачей крови необходимо проконсультироваться у лечащего врача о возможном влиянии принимаемых лекарственных средств на результат проводимого исследования;
• строго по согласованию с лечащим врачом прекратить прием тех медицинских препаратов, которые могут исказить результат (с учетом времени их выведения из организма), а в случае невозможности отмены – предупредить об этом работников лаборатории;
• непосредственно перед отбором пробы желательно провести в спокойствии 10-15 минут.

Внимание!Кровь на анализ не отбирается после внутримышечных и внутривенных инъекций, физиотерапевтических процедур, массажа, переливания крови, флюорографии, кольпоскопии, гастроскопии, биопсии, пункции, рентгеновского, мануального, инструментального, ректального, ультразвукового исследования, электрокардиограммы, других терапевтических и/или диагностических манипуляций.

Важно! При проведении исследований в динамике сдачу крови рекомендуется осуществлять в одной и той же лаборатории, в одно и то же время суток, максимально соблюдая условия подготовки к тестированию (режим питания, физических нагрузок и т.д.).

Показания к исследованию

Тестирование является дополнительным к ПЦР-исследованию методом лабораторной диагностики и может применяться:

• для раннего выявления коронавирусной инфекции;
• для выявления бессимптомных носителей SARS-CoV-2;
• для обследования лиц, находившихся в тесном контакте с больными коронавирусом (как с теми, у кого присутствуют явные симптомы заболевания, так и с теми, у кого наличие инфицирования подтверждено только лабораторными методами диагностики (бессимптомными носителями));
• для обследования лиц, которые в силу профессиональной деятельности постоянно находятся в контакте с больными;
• для предварительного определения тяжести течения коронавирусной инфекции.

Интерпретация исследования

Данный тест полуколичественный. Исследование проводится с помощью иммуноферментного анализатора. Набор реагентов « SARS-CoV-2-ИФА-БЕСТ» АО «Вектор-Бест» г. Новосибирск, позволяет не просто выявить наличие/отсутствие антител в исследуемой пробе, но сделать количественную оценку иммуноглобулинов класса А, используя титр (максимальное разведение сыворотки крови, при котором выявляют антитела с точностью до сотых). Затем полученный показатель переводится в цифровое выражение посредством пересчета оптической плотности. Результат выдается в форме коэффициента позитивности (КП). Он равен:

КП = оптическая плотность конкретной пробы/пороговое значение

Универсальность коэффициента позитивности позволяет применять его при проведении всех иммуноферментных исследований. Данная величина отражает, насколько позитивен конкретный показатель анализа. Он дает возможность врачам более точно истолковывать полученные результаты. Концентрация антител и коэффициент позитивности – показатели, не связанные между собой, поэтому КП нецелесообразно применять для наблюдения динамики течения заболевания или действенности проводимого лечения.

Интерпретация коэффициента позитивности:

• отрицательный: < 0,80;
• положительный: > 1,10;
• сомнительный: 0,85 - 1,0.

Отрицательный ответ может быть получен:

• при отсутствии инфицирования коронавирусом;
• на ранней стадии, когда выработка антител еще не началась или их уровень не определяемо низкий;
• в силу особенностей иммунной реакции организма.

Важно! При наличии клинических проявлений острой респираторно-вирусной инфекции отсутствие антител класса А не является однозначным подтверждением отсутствия коронавируса.

Положительный ответ свидетельствует о начальной (острой) стадии коронавирусной инфекции.

Пограничный результат не позволяет утверждать с достаточной долей вероятности о наличии/отсутствии инфицирования SARS-CoV-2. Для подтверждения/опровержения коронавирусной инфекции через 10-14 дней (при наличии симптомов заболевания – через 5-7 дней) тестирование необходимо пройти повторно.

Результат данного теста не является диагнозом. Для точной диагностики необходимо проведение комплексного исследования при интерпретации результатов которого необходимо учитывать также наличие/отсутствие клинических признаков заболевания. При проведении данного теста нельзя полностью исключить перекрестные реакции с антителами к антигенам более ранних форм коронавируса. Кроме того, результаты исследований онкологических больных и пациентов с нарушениями функций иммунной системы нужно интерпретировать с осторожностью.

Результат теста выдается на бланке лаборатории медицинской компании «Наука». Пример по данному анализу представлен ниже:

Ф.И.О.: Иванов Сидор Петрович  Пол: м     Дата рождения: хх.хх.хххх

Дата исследования: хх.хх.хххх

Литература:

1. Felix F. Loeffler, еt al. // Distinct early IgA profile may determine severity of COVID-19 symptoms: an immunological case series. // medRxiv, Posted April 17, 2020.

2. Материалы фирмы-производителя реагентов.